Plasmide CRISPR/Cas9 KO LSECtin (h): sc-404538

Présentation

CLEC4G code pour LSECtin, un récepteur lectine de type C exprimé principalement par les cellules endothéliales sinusoïdales du foie, qui se lie à des motifs glycanes spécifiques présents sur des glycoprotéines circulantes ainsi que sur certains agents pathogènes. Par des interactions dépendantes de la reconnaissance des glucides, LSECtin contribue à la surveillance immunitaire hépatique, à l’adhérence cellule–cellule et à la modulation du trafic leucocytaire au sein du microenvironnement hépatique. Des interactions de signalisation rapportées incluent la régulation des voies de capture et de traitement des antigènes et la coordination avec d’autres réseaux de récepteurs lectines et de récepteurs scavengers, qui orientent les réponses vers la tolérance ou, au contraire, vers l’inflammation. Une expression dérégulée de CLEC4G/LSECtin a été associée à des interactions tumeur–foie altérées et à des phénotypes d’échappement immunitaire, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de l’inflammation hépatique, de la biologie des infections et des processus liés aux métastases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LSECtin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLEC4G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLEC4G, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLEC4G à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LSECtin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLEC4G pour l'étude de la signalisation de LSECtin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLEC4G essentiels à la fonction de LSECtin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLEC4G pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LSECtin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LSECtin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLEC4G. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LSECtin plasmide HDR (h) et le LSECtin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLEC4G pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLEC4G définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.