LSECtin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404538

Descripción general

CLEC4G codifica LSECtin, un receptor de lectina tipo C expresado predominantemente por las células endoteliales sinusoidales hepáticas, que se une a motivos específicos de glicanos en glicoproteínas circulantes y en determinados patógenos. Mediante interacciones dependientes del reconocimiento de carbohidratos, LSECtin contribuye a la vigilancia inmunitaria hepática, la adhesión célula–célula y la modulación del tráfico de leucocitos dentro del microambiente del hígado. Entre los cruces de señalización descritos se incluyen la regulación de vías de captura y procesamiento de antígenos y la coordinación con otras redes de receptores de lectinas y “scavenger” (depuradores), que moldean respuestas tolerogénicas frente a inflamatorias. La expresión desregulada de CLEC4G/LSECtin se ha asociado con alteraciones en las interacciones tumor–hígado y con fenotipos de evasión inmunitaria, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de inflamación hepática, biología de la infección y procesos relacionados con la metástasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LSECtin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLEC4G en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLEC4G junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLEC4G tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LSECtin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLEC4G para la investigación de la señalización de LSECtin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLEC4G críticos para la función de LSECtin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLEC4G para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LSECtin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LSECtin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLEC4G. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LSECtin (h) y el plásmido HDR LSECtin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLEC4G para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLEC4G definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.