Plasmide CRISPR d'Activation (h) LSECtin: sc-404538-ACT

Le gène humain **CLEC4G** code **LSECtin** (CLEC4G), une lectine de type C exprimée principalement par les cellules endothéliales sinusoïdales hépatiques, qui intervient dans la reconnaissance et l’adhésion dépendantes des glycannes. Par l’intermédiaire de son domaine de reconnaissance des glucides, LSECtin participe à l’endocytose et à la modulation des interactions cellule–cellule au niveau du sinus hépatique, orientant la gestion des antigènes et le trafic des cellules immunitaires dans le microenvironnement hépatique. L’activité de CLEC4G/LSECtin s’inscrit dans des réseaux de reconnaissance lectine–glycoprotéine et dans des voies de signalisation de l’immunité innée qui influencent les réponses inflammatoires et l’homéostasie tissulaire. Des altérations d’expression ont été rapportées dans des contextes d’inflammation hépatique, de fibrose et de modulation immunitaire associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies du foie.

LSECtin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLEC4G sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LSECtin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLEC4G dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLEC4G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LSECtin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLEC4G natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LSECtin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LSECtin dans les cellules tumorales présentant une expression de CLEC4G silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.