Plasmide CRISPR/Cas9 KO LSDP5 (m): sc-426297

Présentation

La périlipine 5 (Plin5), également appelée protéine 5 des gouttelettes de stockage lipidique (LSDP5), est une protéine associée aux gouttelettes lipidiques qui régule le stockage intracellulaire des triacylglycérols et coordonne l’acheminement des acides gras vers les mitochondries pour la β‑oxydation. Dans les tissus oxydatifs de la souris, tels que le cœur, le foie et le muscle squelettique, PLIN5 contribue à équilibrer la séquestration des lipides et la lipolyse en modulant l’accès des lipases à la surface des gouttelettes et en couplant la mobilisation lipidique à la capacité oxydative mitochondriale. Par ces fonctions, PLIN5 influence l’homéostasie énergétique, la signalisation induite par les lipides et les réponses cellulaires à la disponibilité des nutriments et au jeûne. Une dérégulation de la dynamique des gouttelettes lipidiques liée à PLIN5 est pertinente dans des modèles expérimentaux de stéatose, de résistance à l’insuline et de stress lipotoxique, qui affectent la fonction mitochondriale et des phénotypes métaboliques associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LSDP5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Plin5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Plin5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Plin5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LSDP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Plin5 pour l'étude de la signalisation de LSDP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Plin5 essentiels à la fonction de LSDP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Plin5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LSDP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LSDP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Plin5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LSDP5 plasmide HDR (m) et le LSDP5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Plin5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Plin5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.