Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC26 (m): sc-432708

Présentation

Lrrc26 code LRRC26, une protéine auxiliaire contenant des répétitions riches en leucine qui module la régulation (gating) des canaux potassiques BK (à grande conductance) activés par le Ca2+ et le voltage. En décalant l’activation des canaux BK vers des potentiels membranaires plus physiologiques, LRRC26 influence l’excitabilité membranaire, la dynamique de la signalisation Ca2+ et les processus de transport ionique épithélial. Ce rôle régulateur relie LRRC26 à des voies contrôlant le tonus du muscle lisse, la fonction des épithéliums sécréteurs et le couplage stimulus‑sécrétion. Des altérations de la régulation des canaux BK et de l’expression des sous-unités auxiliaires ont été associées à des dysfonctionnements physiologiques dans des tissus excitables et épithéliaux, ce qui étaye l’utilisation de modèles Lrrc26 pour explorer des mécanismes pertinents pour les canalopathies et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC26 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lrrc26 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lrrc26, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lrrc26 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRRC26.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lrrc26 pour l'étude de la signalisation de LRRC26, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lrrc26 essentiels à la fonction de LRRC26
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lrrc26 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRRC26 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LRRC26 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lrrc26. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRRC26 plasmide HDR (m) et le LRRC26 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lrrc26 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lrrc26 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.