LRP6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400844

Descripción general

LRP6 (proteína 6 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad) es un correceptor transmembrana de paso único esencial para la señalización canónica Wnt/β-catenina, ya que forma complejos inducidos por ligando con receptores Frizzled para promover el reclutamiento de Dishevelled y la inhibición del complejo de destrucción de β-catenina. A través de esta vía, LRP6 regula el patrón embrionario, el mantenimiento de células madre, la proliferación y la diferenciación celulares, y puede integrar señales de antagonistas extracelulares como DKK y la esclerostina, que modulan la disponibilidad del receptor. La actividad o expresión alterada de LRP6 se ha asociado con la desregulación de la señalización Wnt observada en diversos contextos, incluidos la biología del cáncer, fenotipos óseos y metabólicos, y procesos del neurodesarrollo. Como nodo de señalización cercano a la membrana, LRP6 se investiga con frecuencia para analizar el tráfico de receptores, el ensamblaje del signalosoma y el crosstalk entre vías que afectan a los programas transcripcionales aguas abajo de β-catenina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LRP6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LRP6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LRP6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LRP6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LRP6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LRP6 para la investigación de la señalización de LRP6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LRP6 críticos para la función de LRP6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LRP6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LRP6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LRP6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LRP6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LRP6 (h) y el plásmido HDR LRP6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LRP6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LRP6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.