Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRP6: sc-400844-ACT

LRP6 (protéine 6 apparentée au récepteur des lipoprotéines de basse densité) est un corécepteur transmembranaire à passage unique qui coopère avec les récepteurs Frizzled pour transmettre la signalisation canonique Wnt/β-caténine. Lors de la liaison d’un ligand Wnt, la phosphorylation de LRP6 favorise l’assemblage du signalosome, la stabilisation de la β-caténine et l’activation de programmes transcriptionnels contrôlant le destin cellulaire, la prolifération et le maintien des cellules souches/progénitrices. LRP6 interagit également avec des voies régissant le trafic des récepteurs et l’endocytose, modulant l’amplitude et la durée des réponses Wnt. Une activité dérégulée de LRP6 et un déséquilibre de la voie Wnt sont largement impliqués dans des anomalies du développement et dans des processus liés aux maladies, notamment la signalisation oncogénique, la neurobiologie et la régulation métabolique.

LRP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRP6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRP6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRP6 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.