Plasmide Double Nickase (h) LRP5: sc-401331-NIC

LRP5 (protéine 5 apparentée au récepteur des lipoprotéines de faible densité) est un co‑récepteur transmembranaire à passage unique qui s’associe aux récepteurs Frizzled pour transmettre la signalisation canonique Wnt/β‑caténine. En modulant la stabilisation de la β‑caténine et la transcription dépendante de TCF/LEF, LRP5 régule l’activité des ostéoblastes, l’acquisition de la masse osseuse, le développement vasculaire rétinien et, plus largement, des programmes de spécification du destin cellulaire. La fonction de LRP5 recoupe l’action de modulateurs et d’antagonistes extracellulaires de Wnt, notamment DKK et la sclérostine, reliant la disponibilité du récepteur à la membrane plasmique aux sorties transcriptionnelles en aval. Les variations génétiques ou le dérèglement de LRP5 sont associés à des phénotypes de densité osseuse altérée et à des troubles vasculaires oculaires, ce qui en fait une cible largement utilisée pour les études mécanistiques du contrôle de la voie Wnt.

LRP5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LRP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LRP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LRP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LRP5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.