Plasmide Double Nickase (m) LRP16: sc-430699-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LRP16 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LRP16 Double Nickase (m) et le plasmide LRP16 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Macrod1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) LRP16 | sc-430699-NIC | 20 µg | $410.00 |
Macrod1 code LRP16, une protéine nucléaire contenant un macrodomaine, capable de lier le mono-ADP-ribose et d’interagir avec la signalisation d’ADP-ribosylation dépendante des PARP. Dans les cellules de souris, LRP16 a été associée à la régulation de processus liés à la chromatine, notamment le contrôle transcriptionnel, les réponses aux dommages de l’ADN et la maintenance du génome couplée au cycle cellulaire. Par ces fonctions, MACROD1/LRP16 est étudiée dans des voies reliant la signalisation des récepteurs nucléaires, les réponses au stress et la dynamique des modifications post-traductionnelles. Une expression altérée ou une activité dérégulée de LRP16 est fréquemment examinée dans des contextes de contrôle de la prolifération et d’instabilité génomique, pertinents pour la biologie du cancer et des modèles de signalisation inflammatoire.
LRP16 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Macrod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Macrod1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Macrod1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Macrod1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.