Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP16 (h): sc-405616

Présentation

MACROD1 code pour LRP16, une protéine nucléaire contenant un macrodomaine qui se lie à l’ADP-ribose et agit comme une « effaceuse » de la mono‑ADP‑ribosylation sur des protéines cibles. LRP16 participe à la régulation de programmes transcriptionnels et de processus associés à la chromatine, notamment via des interactions croisées avec la signalisation des récepteurs hormonaux nucléaires et les voies de l’ADP‑ribosylation dépendantes de PARP, qui influencent les réponses aux dommages de l’ADN. Par ces activités, MACROD1 peut affecter le contrôle du cycle cellulaire, la signalisation de stress et le maintien de la stabilité génomique. Une expression ou une fonction altérée de MACROD1/LRP16 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et fait fréquemment l’objet d’études en lien avec la prolifération, les signaux de survie et la reprogrammation transcriptionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP16 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MACROD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MACROD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MACROD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRP16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MACROD1 pour l'étude de la signalisation de LRP16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MACROD1 essentiels à la fonction de LRP16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MACROD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRP16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRP16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MACROD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRP16 plasmide HDR (h) et le LRP16 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MACROD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MACROD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.