LRP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421464-NIC

低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質1（LRP1）は、マウスのLrp1遺伝子にコードされる多機能なエンドサイトーシス受容体／シグナル受容体であり、リポタンパク質、プロテアーゼ‐阻害因子複合体、細胞外マトリックス成分など多様なリガンドの取り込みを統合的に制御します。LRP1はアダプタータンパク質や共受容体との相互作用を介して、クラスリン介在性エンドサイトーシス、細胞骨格の再編成、さらにPI3K–AKTやMAPKといったシグナル伝達経路に影響を及ぼし、細胞の遊走や生存を規定します。Lrp1はまた、uPA/uPARやマトリックスメタロプロテアーゼ活性の制御を通じて細胞外プロテオリシスを調節し、受容体トラフィッキングと組織リモデリングを結び付けます。LRP1機能の破綻は、神経生物学、血管・代謝関連の表現型、腫瘍微小環境におけるプロセスなどと関連づけられており、恒常性維持のためのクリアランス機構および細胞シグナル伝達ネットワークにおける重要な結節点として広く研究されています。

LRP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lrp1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lrp1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lrp1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lrp1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。