LRP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400638-ACT

LRP1 (proteína 1 relacionada ao receptor de lipoproteínas de baixa densidade) é um receptor endocítico e de sinalização multifuncional que se liga a diversos ligantes, incluindo lipoproteínas contendo apolipoproteína E, complexos α2-macroglobulina–protease e fatores associados à matriz extracelular. Ele regula a captação e o tráfego mediados por receptor, controla a depuração de proteases extracelulares e coordena a sinalização por vias como MAPK/ERK, PI3K/AKT e TGF-β, de maneira dependente do tipo celular. O LRP1 humano influencia o manejo de lipídios, a migração celular e a homeostase vascular, e tem sido implicado na neurobiologia por meio de papéis no transporte de beta-amiloide (amiloide-β) e na regulação sináptica. A expressão ou função alterada de LRP1 está associada a características cardiometabólicas, a processos relacionados à aterosclerose e a mecanismos relevantes para neurodegeneração e câncer que envolvem remodelamento da matriz extracelular e sinalização por fatores de crescimento.

LRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP1 em células tumorais com expressão de LRP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.