LRIG2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404443-ACT

LRIG2 (leucinreiche Wiederholungen und immunglobulinähnliche Domänen 2) ist ein Single-Pass-Transmembranprotein, das an der Modulation der Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalübertragung an der Zelloberfläche beteiligt ist und dadurch nachgeschaltete Signalwege beeinflusst, die Proliferation, Differenzierung und Überleben regulieren. Über seine extrazellulären LRR-/Ig-ähnlichen Domänen ist LRIG2 dafür prädestiniert, Stärke und Dauer von Wachstumsfaktorantworten zu formen; funktionelle Zusammenhänge wurden insbesondere in Signal-Kontexten beschrieben, die mit der EGFR/ERBB-Familie verknüpft sind. Eine veränderte LRIG2-Expression wurde in mehreren krankheitsassoziierten Transkriptionsprofilen beobachtet, was seine Eignung als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung fehlregulierter Signalgebung, der Steuerung von Zellschicksalsentscheidungen und von Interaktionen mit dem Mikromilieu in menschlichen Zellen unterstützt. Diese Eigenschaften machen LRIG2 zu einem relevanten Ziel, um membrannahe Signalwegregulation und Genexpressionsprogramme zu untersuchen, die mit abnormalem Zellwachstum assoziiert sind.

LRIG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRIG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRIG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRIG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRIG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRIG2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRIG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRIG2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRIG2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRIG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.