LRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405371-ACT

A glicoproteína alfa-2 rica em leucina 1 (LRG1) é uma proteína secretada, com repetições ricas em leucina, que modula a sinalização extracelular em microambientes vasculares e inflamatórios. Em células humanas, a LRG1 influencia o comportamento endotelial e o remodelamento tecidual, com ligações bem descritas ao contexto da via de TGF-β e a alterações nos desfechos da sinalização angiogênica. Sua expressão é regulada durante a ativação imune e respostas ao estresse, e níveis elevados de LRG1 foram relatados em múltiplos cenários patológicos envolvendo neovascularização aberrante e inflamação crônica. Essas propriedades tornam a LRG1 um alvo útil para dissecar a comunicação cruzada entre sinalização por citocinas, dinâmica da matriz extracelular e transições de estado de células vasculares.

LRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRG1 em células tumorais com expressão de LRG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.