Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRG1: sc-405371-ACT

La glycoprotéine alpha-2 riche en leucine 1 (LRG1) est une protéine sécrétée contenant des répétitions riches en leucine, qui module la signalisation extracellulaire dans les microenvironnements vasculaires et inflammatoires. Dans les cellules humaines, LRG1 influence le comportement endothélial et le remodelage tissulaire, avec des liens bien établis au contexte de la voie TGF-β et à des modifications des sorties de signalisation angiogénique. Son expression est régulée lors de l’activation immunitaire et des réponses au stress, et une élévation de LRG1 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques impliquant une néovascularisation aberrante et une inflammation chronique. Ces propriétés font de LRG1 une cible utile pour disséquer les interactions entre la signalisation des cytokines, la dynamique de la matrice extracellulaire et les transitions d’état des cellules vasculaires.

LRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.