Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (h): sc-402016

Présentation

ZBTB7A code le facteur de transcription LRF/Pokemon (également appelé FBI-1), une protéine à domaines BTB/POZ et à doigts de zinc qui se fixe à des éléments d’ADN riches en GC afin de moduler des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Il participe à la répression transcriptionnelle dépendante de la chromatine et s’interface avec des voies régissant la prolifération, la différenciation et l’engagement de lignée, notamment via la régulation, de manière contextuelle, de gènes du métabolisme et de la réponse au stress. LRF/Pokemon est associé à l’hématopoïèse et au développement des cellules immunitaires et a été étudié pour ses effets sur la maturation érythroïde et la différenciation lymphoïde. Des altérations de l’activité ou de l’expression de ZBTB7A ont été associées à des réseaux transcriptionnels dérégulés dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs, soulignant sa pertinence pour des études mécanistiques des voies oncogéniques et du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB7A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB7A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB7A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRF/Pokemon.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB7A pour l'étude de la signalisation de LRF/Pokemon, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB7A essentiels à la fonction de LRF/Pokemon
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB7A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRF/Pokemon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRF/Pokemon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB7A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRF/Pokemon plasmide HDR (h) et le LRF/Pokemon (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB7A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB7A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.