LRCH4 Double Nickase Plasmid (h): sc-405444-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LRCH4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LRCH4 Double-Nickase-Plasmid (h) und LRCH4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LRCH4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LRCH4: sc-377441
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LRCH4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRCH4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRCH4 (leucine-rich repeats and calponin homology domain containing 4) kodiert ein zytosolisches Protein, das durch LRR- und CH-ähnliche Domänen gekennzeichnet ist, die häufig mit Protein-Protein-Interaktionen und der Organisation des Zytoskeletts in Verbindung stehen. Zunehmende Hinweise verknüpfen Mitglieder der LRCH-Familie mit der Regulation der Aktindynamik, des Membrantransports und der angeborenen Immun-Signalgebung, wobei LRCH4 an der Modulation rezeptornaher Entzündungswege wie TLR-vermittelter Antworten beteiligt ist. Über diese Prozesse kann LRCH4 die Zellbeweglichkeit, Adhäsion und stressresponsive Transkriptionsprogramme in immunologischen und epithelialen Kontexten beeinflussen. Fehlregulierte Entzündungssignale und zytoskelettales Remodeling sind wiederkehrende Merkmale in immunvermittelten Erkrankungen und der Krebsbiologie, wodurch LRCH4 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien von Signalwegen darstellt.
LRCH4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LRCH4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LRCH4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LRCH4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LRCH4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.