Plasmide CRISPR/Cas9 KO LPLUNC3 (h): sc-406344

Présentation

BPIFB3 (LPLUNC3) est une protéine sécrétée appartenant à la famille des protéines contenant un domaine de type « BPI fold », enrichie dans les épithéliums des muqueuses, où l’on pense qu’elle contribue à la défense innée au niveau des surfaces des voies aériennes et du tractus aérodigestif supérieur. Les protéines de cette famille interagissent avec des lipides associés aux microorganismes et peuvent moduler l’homéostasie de la barrière épithéliale en influençant la signalisation inflammatoire et les réponses antimicrobiennes. L’expression de BPIFB3 répond à des signaux environnementaux et inflammatoires et a été associée à la régulation de programmes de différenciation épithéliale ainsi qu’aux interactions hôte–microbiote. Des variations des niveaux de BPIFB3/LPLUNC3 ont été rapportées dans divers états inflammatoires des voies aériennes et pathologies liées à l’épithélium, ce qui étaye son intérêt comme marqueur et comme nœud mécanistique dans la recherche en biologie des muqueuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LPLUNC3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BPIFB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BPIFB3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BPIFB3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LPLUNC3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BPIFB3 pour l'étude de la signalisation de LPLUNC3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BPIFB3 essentiels à la fonction de LPLUNC3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BPIFB3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LPLUNC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LPLUNC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BPIFB3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LPLUNC3 plasmide HDR (h) et le LPLUNC3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BPIFB3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BPIFB3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.