LPL Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421460-ACT

O gene Lpl de camundongo codifica a lipase de lipoproteínas (LPL), uma enzima secretada que se liga ao heparan sulfato e hidrolisa triglicerídeos presentes em quilomícrons circulantes e em VLDL, liberando ácidos graxos para captação pelo tecido adiposo, coração e músculo esquelético. A atividade da LPL é coordenada por fatores endoteliais de transporte e ancoragem, como a GPIHBP1, e é modulada por apolipoproteínas e proteínas do tipo angiopoietina, conectando o estado nutricional ao particionamento de lipídios. Ao regular a captação e o armazenamento de lipídios, a LPL contribui para a homeostase energética, a biologia dos adipócitos e a sensibilidade à insulina, e sua desregulação está associada a hipertrigliceridemia, esteatose hepática e fenótipos relacionados à aterosclerose em modelos de doença metabólica. Essas características tornam o Lpl um nó central para o estudo do metabolismo de lipoproteínas, do manejo vascular de lipídios e de vias metabólicas adjacentes à inflamação em sistemas murinos.

LPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lpl sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lpl em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lpl, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LPL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lpl nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LPL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LPL em células tumorais com expressão de Lpl silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.