Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-ζ: sc-410305-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-ζ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LPAAT-ζ Double Nickase (h) et le plasmide LPAAT-ζ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPAT4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-ζ | sc-410305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LPAAT-ζ | sc-410305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPAT4 code la lysophosphatidique acide acyltransférase zêta (LPAAT-ζ), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui acyle l’acide lysophosphatidique pour produire l’acide phosphatidique, un intermédiaire central de la biosynthèse de novo des glycérolipides. En contrôlant la disponibilité en acide phosphatidique, LPAAT-ζ influence la production de triacylglycérols et de phospholipides, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et les processus de remodelage membranaire liés à l’homéostasie métabolique. Le flux lipidique dépendant de GPAT4 peut moduler les réponses cellulaires au stress et la fonction des organites via des effets sur la composition des membranes et sur les lipides de signalisation. Les dérégulations de la synthèse des glycérolipides et des voies de stockage lipidique impliquant GPAT4 sont pertinentes pour l’étude de la biologie des maladies métaboliques, des mécanismes liés à la stéatose et de la signalisation induite par les lipides dans des modèles de cancer et d’inflammation.
LPAAT-ζ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPAT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPAT4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPAT4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPAT4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.