Plásmido CRISPR de Activación (h) LPAAT-β: sc-405045-ACT

AGPAT2 codifica la aciltransferasa beta del ácido lisofosfatídico (LPAAT-β), una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza la acilación del ácido lisofosfatídico para formar ácido fosfatídico, un intermediario clave en la biosíntesis de glicerofosfolípidos y triacilglicéridos. Al controlar la disponibilidad de ácido fosfatídico, LPAAT-β influye en la biogénesis de membranas, la formación de gotas lipídicas y los procesos de señalización mediados por lípidos que se interconectan con el estrés metabólico y la homeostasis de los orgánulos. La actividad de AGPAT2 está estrechamente vinculada al almacenamiento lipídico en adipocitos y al equilibrio energético sistémico, y las variantes con pérdida de función se asocian con lipodistrofia generalizada congénita y una disrregulación metabólica grave. Estas características convierten a AGPAT2 en una diana relevante para estudiar la remodelación lipídica, la adipogénesis y las alteraciones asociadas a enfermedad en el metabolismo de fosfolípidos.

LPAAT-β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGPAT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LPAAT-β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGPAT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGPAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LPAAT-β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGPAT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LPAAT-β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LPAAT-β en células tumorales con expresión de AGPAT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.