Plasmide CRISPR d'Activation (h) LOXL2: sc-401021-ACT

LOXL2 humain (lysyl oxydase‑like 2) est une amine oxydase sécrétée, dépendante du cuivre, qui catalyse la désamination oxydative de résidus de lysine dans le collagène et l’élastine, favorisant la réticulation covalente et la maturation de la matrice extracellulaire (MEC). Par le remodelage de la MEC, LOXL2 régule l’adhérence cellulaire, la migration et la mécanotransduction, en s’articulant avec des voies liées à la transition épithélio‑mésenchymateuse, à la fibrose tissulaire et au remodelage stromal. Une expression et une activité dérégulées de LOXL2 sont fréquemment associées à des modifications de la rigidité matricielle et à des phénotypes invasifs en cancérologie, ainsi qu’à des microenvironnements fibrosants et inflammatoires. Ces fonctions font de LOXL2 une cible utile pour étudier la régulation du comportement cellulaire induite par la MEC, les processus liés aux métastases et la signalisation du microenvironnement.

LOXL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LOXL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LOXL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LOXL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LOXL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LOXL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LOXL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LOXL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LOXL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LOXL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.