Plasmide CRISPR d'Activation (h) LOXL1: sc-401965-ACT

LOXL1 code la lysyl‑oxydase‑like 1, une amine oxydase sécrétée dépendante du cuivre qui catalyse la désamination oxydative des résidus de lysine dans le collagène et l’élastine, permettant la réticulation covalente et la stabilisation de l’architecture de la matrice extracellulaire. En régulant l’assemblage des fibres élastiques et le remodelage matriciel, LOXL1 influence la mécanique des tissus, la signalisation cellule–matrice et des processus tels que la fibrose et la réparation des plaies. Une activité altérée de LOXL1 a été associée à des troubles de la matrice extracellulaire des tissus conjonctifs et de l’œil, notamment au syndrome d’exfoliation/au risque de glaucome, et elle est étudiée dans le contexte de l’intégrité des tissus vasculaires et du plancher pelvien. En tant qu’enzyme modifiant la matrice, LOXL1 constitue un point d’entrée utile pour explorer l’homéostasie de la MEC, la mécanobiologie et les phénotypes pathologiques liés au remodelage dans des modèles cellulaires humains.

LOXL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LOXL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LOXL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LOXL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LOXL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LOXL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LOXL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LOXL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LOXL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LOXL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.