LOC100129480 Double Nickase Plasmid (h): sc-418668-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LOC100129480 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LOC100129480 Double-Nickase-Plasmid (h) und LOC100129480 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MKRN2OS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LOC100129480 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418668-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LOC100129480 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418668-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MKRN2OS (Mensch) ist ein Antisense-/überlappendes Transkript, das mit dem Lokus LOC100129480 assoziiert ist, und es wird erwartet, dass es über RNA-vermittelte Mechanismen wie transkriptionelle Interferenz, Chromatin-Modulation oder Kontrolle der RNA-Stabilität an der lokusspezifischen Regulation der Genexpression beteiligt ist. Das annotierte Proteinprodukt LOC100129480 ist bislang nur unzureichend charakterisiert, doch sein genomischer Kontext legt mögliche Verknüpfungen zu ubiquitinbezogener Signalübertragung und posttranskriptioneller Regulation nahe, die Zellzustandsentscheidungen wie Proliferation, Stressantworten und Differenzierung beeinflussen können. Eine Fehlregulation von Antisense-Transkription und nichtkodierenden RNA-Netzwerken wird häufig bei Krebs und anderen komplexen Erkrankungen beobachtet, was MKRN2OS/LOC100129480 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Genregulation an bidirektionalen oder überlappenden Loci macht. Funktionelle Untersuchungen können dazu beitragen, zu klären, wie dieser Lokus die RNA-Prozessierung, proteostaseassoziierte Signalwege und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme in relevanten humanen Zellmodellen beeinflusst.
LOC100129480 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MKRN2OS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MKRN2OS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MKRN2OS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MKRN2OS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.