Plasmide CRISPR/Cas9 KO LMTK3 (h): sc-403191

Présentation

LMTK3 (lemur tyrosine kinase 3) code une kinase sérine/thréonine associée à la membrane, impliquée dans la régulation de voies de signalisation intracellulaire et de trafic vésiculaire qui influencent le renouvellement des récepteurs et la durée des signaux. Dans des contextes épithéliaux, LMTK3 a été associée à la modulation de programmes transcriptionnels pilotés par des kinases et au dialogue avec la signalisation des récepteurs hormonaux, façonnant la prolifération cellulaire et les réponses au stress. Une expression ou une activité altérée de LMTK3 a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour le cancer, où elle est étudiée pour son impact sur la réponse aux facteurs de croissance, la signalisation de survie et des phénotypes de résistance associés aux traitements. Par conséquent, LMTK3 constitue une cible utile pour disséquer l’architecture des réseaux de kinases, la dynamique endomembranaire et les sorties transcriptionnelles en aval dans des systèmes modèles humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LMTK3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LMTK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LMTK3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LMTK3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LMTK3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LMTK3 pour l'étude de la signalisation de LMTK3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LMTK3 essentiels à la fonction de LMTK3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LMTK3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LMTK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LMTK3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LMTK3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LMTK3 plasmide HDR (h) et le LMTK3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LMTK3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LMTK3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.