Plasmide CRISPR d'Activation (h) LMTK3: sc-403191-ACT

La lemur tyrosine kinase 3 (LMTK3) humaine code une kinase Ser/Thr associée à la membrane, impliquée dans la régulation du trafic des récepteurs et de la transduction du signal, notamment via la modulation des voies des récepteurs aux facteurs de croissance et aux hormones. LMTK3 influence la prolifération cellulaire, la survie et les programmes transcriptionnels grâce à un contrôle, dépendant de son activité kinase, du tri endosomal et des réseaux de signalisation en aval. Une expression dérégulée de LMTK3 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et fait fréquemment l’objet d’études pour son rôle dans la signalisation oncogénique, la sensibilité endocrine et les mécanismes de résistance aux traitements. Par conséquent, LMTK3 constitue une cible utile pour analyser le dialogue entre voies dépendantes des kinases, le renouvellement des récepteurs et la régulation transcriptionnelle dépendante du contexte dans des modèles cellulaires humains.

LMTK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LMTK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LMTK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LMTK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LMTK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LMTK3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LMTK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LMTK3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LMTK3 dans les cellules tumorales présentant une expression de LMTK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.