Plasmide Double Nickase (h) LMP2: sc-401615-NIC

PSMB9 code la sous-unité catalytique de l’immunoprotéasome humain LMP2 (β1i), qui remplace la sous-unité constitutive β1 en réponse à l’interféron-γ et à d’autres signaux inflammatoires. LMP2 contribue à la protéolyse dépendante de l’ubiquitine et façonne le répertoire de peptides générés pour le traitement et la présentation des antigènes par le CMH de classe I, influençant ainsi la reconnaissance par les lymphocytes T CD8+. Par son rôle dans l’assemblage de l’immunoprotéasome et dans les préférences de clivage protéasomal, PSMB9 fait le lien entre la signalisation inflammatoire innée, la surveillance immunitaire adaptative et l’homéostasie des protéines cellulaires. Des altérations de l’activité ou de l’expression de PSMB9 ont été associées à une présentation antigénique dysrégulée et à des phénotypes inflammatoires pertinents pour l’auto-immunité, la biologie des infections et les interactions immunitaires liées aux tumeurs.

LMP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PSMB9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PSMB9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PSMB9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PSMB9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.