LIX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406006-ACT

O LIX1 humano (limb expression 1) codifica uma proteína conservada implicada em programas de padronização do desenvolvimento e no controle dependente do contexto da diferenciação celular. Embora o seu mecanismo molecular ainda não esteja completamente definido, a expressão de LIX1 correlaciona-se com estados mesenquimais e semelhantes a progenitores e tem sido associada a redes transcricionais que moldam a especificação de linhagens e a morfogénese dos tecidos. Níveis desregulados de LIX1 foram relatados em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo cancros nos quais alterações na diferenciação, migração e interações com o estroma contribuem para a progressão. Como resultado, o LIX1 é frequentemente investigado como um nó regulatório que liga programas de expressão génica do desenvolvimento à plasticidade do estado celular.

LIX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LIX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LIX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LIX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LIX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIX1 em células tumorais com expressão de LIX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.