Lingo-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404453

Descripción general

LINGO1 codifica Lingo-1, una proteína transmembrana enriquecida en el sistema nervioso central (SNC), que contiene repeticiones ricas en leucina y dominios tipo inmunoglobulina, y que actúa como componente de complejos receptores que regulan el crecimiento neuronal y la mielinización. Lingo-1 interactúa con la señalización del receptor de Nogo y vías relacionadas para modular la guía axonal, el crecimiento de neuritas, la diferenciación de oligodendrocitos y la remodelación del citoesqueleto. A través de sus efectos sobre la comunicación neurona–glía y las señales inhibitorias del sistema nervioso, LINGO1 se ha estudiado en el contexto de la desmielinización, el fracaso de la regeneración axonal y procesos asociados a la neurodegeneración. La alteración de la expresión o de la señalización de LINGO1 también se ha investigado por su posible impacto en la plasticidad sináptica y en las respuestas neuroinflamatorias en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Lingo-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LINGO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LINGO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LINGO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Lingo-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LINGO1 para la investigación de la señalización de Lingo-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LINGO1 críticos para la función de Lingo-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LINGO1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Lingo-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Lingo-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LINGO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Lingo-1 (h) y el plásmido HDR Lingo-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LINGO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LINGO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.