Plasmide CRISPR d'Activation (h) LIN-28B: sc-402851-ACT

Le gène humain **LIN28B** code la protéine de liaison à l’ARN **LIN-28B**, un régulateur hétérochronique qui supprime la maturation de la famille de microARN **let-7** et remodèle ainsi les programmes de régulation génique post‑transcriptionnelle contrôlant la prolifération, le métabolisme et l’engagement de lignée. En modulant les réseaux dépendants de let-7, LIN-28B influence le calendrier du développement, les états cellulaires de type souche et la reprogrammation cellulaire, en s’articulant avec des voies associées aux sorties de signalisation **MYC**, **RAS/MAPK** et **mTOR**. Une activité dérégulée de LIN28B a été associée à une différenciation altérée et à un contrôle aberrant de la croissance dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment des programmes transcriptionnels oncogéniques et des troubles du développement pédiatriques. Ces propriétés font de LIN28B un nœud utile pour étudier la biogenèse des miARN, le métabolisme de l’ARN et les circuits de régulation génique dans les cellules humaines.

LIN-28B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LIN28B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LIN-28B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LIN28B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LIN28B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LIN-28B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LIN28B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LIN-28B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LIN-28B dans les cellules tumorales présentant une expression de LIN28B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.