Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
LHX4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421427
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- LHX4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico LHX4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LHX4 Anticuerpo (E-10): sc-374562
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
LHX4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421427 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Lhx4 codifica la proteína homeobox LIM 4 (LHX4), un factor de transcripción que se une al ADN a través de un homeodominio y coordina programas de expresión génica fundamentales para el patrón embrionario y la organogénesis. Durante el desarrollo del ratón, LHX4 contribuye a la especificación y diferenciación de los linajes de la hipófisis anterior, así como a procesos más amplios del desarrollo neuronal, al integrarse con cofactores con dominio LIM y con redes transcripcionales de tipo homeobox. Su actividad influye en las decisiones de destino celular, el compromiso de linaje y la regulación transcripcional dependiente de morfógenos durante la formación de tejidos. La desregulación de las vías de desarrollo asociadas a LHX4 es relevante en la investigación de fenotipos hipofisarios y del neurodesarrollo, donde una alteración en la dosis de factores de transcripción puede perturbar la formación del eje endocrino y el establecimiento de circuitos neuronales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO LHX4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lhx4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lhx4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lhx4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LHX4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lhx4 para la investigación de la señalización de LHX4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Lhx4 críticos para la función de LHX4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lhx4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido LHX4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LHX4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lhx4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LHX4 (m) y el plásmido HDR LHX4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lhx4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lhx4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.