Plasmide CRISPR d'Activation (h) LHX1: sc-403100-ACT

LHX1 (LIM homeobox 1) code un facteur de transcription à domaine LIM qui coordonne la spécification des lignages et la mise en place des tissus au cours de l’embryogenèse, notamment dans le développement du système nerveux, du rein et de l’appareil reproducteur. En se liant à l’ADN via son homéobox et en assemblant des complexes transcriptionnels grâce aux interactions LIM, LHX1 régule des programmes contrôlant les décisions de destinée cellulaire, la morphogenèse et la différenciation. Une expression dérégulée de LHX1 ou une altération des circuits développementaux a été impliquée dans des anomalies congénitales et a été observée dans des états transcriptionnels associés au cancer, où des régulateurs du développement sont réactivés. En tant que nœud des réseaux de régulation génique du développement, LHX1 est fréquemment étudié dans la différenciation des cellules souches, les modèles d’organogenèse et le contrôle transcriptionnel de l’identité tissulaire.

LHX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LHX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LHX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LHX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LHX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LHX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LHX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LHX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LHX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LHX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.