Plasmide Double Nickase (h) LHR: sc-400750-NIC

LHCGR code le récepteur de l’hormone lutéinisante/de la gonadotrophine chorionique (LHR), un RCPG sensible aux gonadotrophines qui régule l’endocrinologie de la reproduction dans les cellules stéroïdogènes. La liaison du ligand active la voie Gs/adénylate cyclase, augmente l’AMPc et stimule des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA contrôlant la biosynthèse des stéroïdes, l’ovulation et la production d’androgènes par les cellules de Leydig, avec un couplage supplémentaire aux voies PLC/PKC et MAPK qui modulent la prolifération et la différenciation. La signalisation du LHR s’intègre aux réseaux développementaux et métaboliques gonadiques, influençant l’expression d’enzymes stéroïdogènes telles que STAR et des membres de la famille CYP. Une dérégulation ou des variations génétiques de LHCGR ont été associées à des troubles du développement sexuel, à des phénotypes de fertilité et à des physiopathologies ovariennes et testiculaires hormono‑dépendantes, pertinentes pour des modèles de recherche mécanistique.

LHR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LHCGR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LHCGR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LHCGR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LHCGR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.