Plasmide CRISPR d'Activation (m) LGR5: sc-420320-ACT

Le gène murin **Lgr5** code le récepteur 5 couplé aux protéines G contenant des répétitions riches en leucine (**LGR5**), un marqueur bien établi des populations adultes de cellules souches et progénitrices dans les cryptes intestinales, les follicules pileux et d’autres épithéliums à renouvellement rapide. LGR5 potentialise la signalisation canonique **Wnt/β-caténine** en se liant aux R-spondines et en modulant l’activité de **RNF43/ZNRF3**, ce qui soutient le maintien des cellules souches, leur prolifération et l’engagement de lignée. Des altérations de l’expression de **Lgr5/LGR5** ont été associées à une régénération et un remodelage épithéliaux dysrégulés dans des contextes inflammatoires et néoplasiques, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier les programmes pilotés par Wnt. En tant que récepteur associé à l’état de « stemness », LGR5 est fréquemment utilisé pour suivre le potentiel clonogénique et disséquer la dynamique des signaux dépendants de la niche.

LGR5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lgr5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LGR5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lgr5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lgr5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LGR5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lgr5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LGR5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LGR5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lgr5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.