LGP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406991-ACT

DHX58 codifica LGP2, un sensore simile a un’elicasi dell’RNA della famiglia DExD/H-box che modula il rilevamento citosolico dell’RNA virale e plasma la segnalazione antivirale innata. LGP2 interagisce con le vie dei recettori tipo RIG-I, influenzando l’induzione dipendente da MAVS degli interferoni di tipo I e dei geni stimolati dall’interferone, e può regolare l’ampiezza e la durata dei programmi trascrizionali infiammatori. Attraverso la regolazione del riconoscimento dell’RNA e delle risposte a valle guidate da NF-κB e IRF, DHX58 contribuisce all’omeostasi immunitaria cellulare e alla restrizione dei patogeni. Un’attività disregolata di DHX58/LGP2 e un’alterata segnalazione dell’interferone sono state associate a una maggiore suscettibilità alle infezioni virali, all’infiammazione cronica e a fenotipi immunitari correlati all’interferone rilevanti per l’immunologia e la ricerca ospite–patogeno.

LGP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DHX58 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LGP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DHX58 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DHX58, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LGP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DHX58 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LGP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LGP2 nelle cellule tumorali con espressione di DHX58 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.