Plásmido Doble Nickase (m) Leukocyte-type 12-LO: sc-419089-NIC

El gen Alox15 de ratón codifica la 12-lipooxigenasa de tipo leucocitario (12-LO), una dioxigenasa de hierro no hemo que oxigena ácidos grasos poliinsaturados como el ácido araquidónico para generar mediadores lipídicos bioactivos, entre ellos 12-HETE y oxilipinas relacionadas. Estos productos participan en señalización sensible al estado redox, regulación de respuestas inflamatorias, quimiotaxis de leucocitos y remodelación lipídica, lo que vincula la actividad de Alox15 con el metabolismo de eicosanoides y los programas de resolución. En contextos de células inmunitarias y vasculares, los metabolitos derivados de 12-LO pueden influir en la señalización de citocinas, el estrés oxidativo y decisiones sobre el destino celular que configuran la inflamación tisular. En consecuencia, Alox15 se estudia ampliamente en modelos de inflamación, aterosclerosis, disfunción metabólica y daño tisular mediado por el sistema inmunitario, donde el equilibrio de mediadores lipídicos es un determinante clave del fenotipo.

Leukocyte-type 12-LO El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Alox15 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Alox15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Alox15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Alox15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.