Plasmide Double Nickase (m) Leukocyte-type 12-LO: sc-419089-NIC

Le gène murin **Alox15** code la **12‑lipoxygénase de type leucocytaire (12‑LO)**, une dioxygénase à fer non hémique qui oxygène des acides gras polyinsaturés tels que l’acide arachidonique afin de générer des médiateurs lipidiques bioactifs, notamment le **12‑HETE** et des oxylipines apparentées. Ces produits participent à la signalisation sensible à l’état rédox, à la régulation des réponses inflammatoires, à la chimiotaxie des leucocytes et au remodelage lipidique, reliant l’activité d’Alox15 au métabolisme des eicosanoïdes et aux programmes de résolution. Dans les contextes des cellules immunitaires et vasculaires, les métabolites dérivés de la 12‑LO peuvent influencer la signalisation des cytokines, le stress oxydant et les décisions de destin cellulaire qui façonnent l’inflammation tissulaire. Par conséquent, **Alox15** est largement étudié dans des modèles d’inflammation, d’athérosclérose, de dysfonction métabolique et de lésions tissulaires médiées par le système immunitaire, où l’équilibre des médiateurs lipidiques est un déterminant majeur du phénotype.

Leukocyte-type 12-LO Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Alox15 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Alox15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Alox15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Alox15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.