Plasmide CRISPR/Cas9 KO LEREPO4 (m): sc-427290

Présentation

Zc3h15 code pour la protéine murine LEREPO4, un facteur de liaison à l’ARN à doigts de zinc prédit, impliqué dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, notamment le contrôle de la stabilité, de la maturation et de la traduction des ARNm. En modulant le devenir des ARN, Zc3h15 est en mesure d’influencer les sorties transcriptionnelles dépendantes des voies de signalisation ainsi que des programmes cellulaires tels que la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Le dérèglement des protéines liant l’ARN et des complexes ribonucléoprotéiques associés est largement associé à des altérations de la signalisation immunitaire et à des phénotypes oncogéniques, ce qui fait de Zc3h15 un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle de l’expression génique. Dans les systèmes modèles chez la souris, la perturbation de Zc3h15 peut être utilisée pour explorer comment une régulation centrée sur l’ARN module l’activité des voies et les transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LEREPO4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zc3h15 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zc3h15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zc3h15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LEREPO4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zc3h15 pour l'étude de la signalisation de LEREPO4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zc3h15 essentiels à la fonction de LEREPO4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zc3h15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LEREPO4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LEREPO4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zc3h15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LEREPO4 plasmide HDR (m) et le LEREPO4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zc3h15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zc3h15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.