Plasmide Double Nickase (h) LDH-B: sc-416429-NIC

LDHB code la sous-unité LDH‑B (LDH‑1) de la lactate déshydrogénase, une enzyme cytosolique qui catalyse la conversion réversible du pyruvate en lactate, avec interconversion concomitante du NADH et du NAD⁺. En contrôlant le flux pyruvate–lactate, la LDH‑B contribue à coordonner la glycolyse avec le métabolisme oxydatif mitochondrial et participe à l’homéostasie rédox cellulaire lorsque les conditions d’oxygène et de nutriments varient. L’activité de LDHB est fréquemment étudiée dans le cadre de la reprogrammation métabolique, notamment les changements d’utilisation du lactate et l’équilibre NAD⁺/NADH, qui influencent la capacité biosynthétique et les réponses au stress. Une expression modifiée de LDHB et des variations de la composition en isoenzymes de la LDH ont été associées à des phénotypes métaboliques observés dans divers modèles pertinents pour les maladies, notamment en biologie tumorale et dans des troubles héréditaires du métabolisme intermédiaire.

LDH-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LDHB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LDHB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LDHB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LDHB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.