Plasmide CRISPR d'Activation (h) LDH-A: sc-400403-ACT

Le gène humain **LDHA** code la lactate déshydrogénase A (LDH-A), une enzyme cytosolique qui catalyse l’interconversion du pyruvate et du lactate, avec recyclage concomitant du NADH/NAD⁺, soutenant le flux glycolytique en conditions aérobies comme hypoxiques. LDH-A constitue un nœud central du métabolisme du glucose et de l’homéostasie rédox, influençant la reprogrammation métabolique associée à une forte demande proliférative et à l’hypoxie du microenvironnement. Une activité altérée de LDHA a été associée à des modifications de la production de lactate, de l’équilibre du pH intracellulaire et de la répartition du carbone entre la glycolyse et l’oxydation mitochondriale, ce qui la rend pertinente pour les études de régulation métabolique en biologie du cancer et dans d’autres troubles caractérisés par une dérégulation du métabolisme énergétique.

LDH-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LDHA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LDH-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LDHA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LDHA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LDH-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LDHA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LDH-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LDH-A dans les cellules tumorales présentant une expression de LDHA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.