Plasmide CRISPR d'Activation (h) LCRG1: sc-410137-ACT

GGNBP2 code pour LCRG1, une protéine nucléaire impliquée dans la régulation transcriptionnelle ainsi que dans le contrôle des programmes cellulaires de prolifération et de différenciation. Les activités rapportées associent GGNBP2 à des processus liés à la chromatine et à la modulation de réseaux d’expression génique influençant la progression du cycle cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de GGNBP2/LCRG1 a été observée dans des études de biologie tumorale et de transformation cellulaire, ce qui étaye son utilisation comme régulateur dépendant du contexte dans des voies de signalisation pertinentes pour le cancer. En tant que cible humaine, LCRG1 constitue un levier utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel en amont, les signatures d’expression génique en aval et les phénotypes liés à la croissance, à la migration et aux réponses au stress.

LCRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GGNBP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LCRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GGNBP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GGNBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LCRG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GGNBP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LCRG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LCRG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GGNBP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.