Lck BP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420811

Descripción general

Hcls1 codifica en ratón el sustrato 1 de Lyn específico de células hematopoyéticas (Lck BP-1), una proteína adaptadora enriquecida en linajes inmunitarios que acopla la señalización del receptor de antígeno a la remodelación del citoesqueleto. Mediante interacciones dependientes de fosforilación con quinasas de la familia Src y complejos reguladores de actina, Lck BP-1 contribuye al flujo de calcio inducido por inmunorreceptores, a la activación de MAPK y a cambios dinámicos en la forma celular y la motilidad. Este nodo de señalización influye en la activación, la adhesión y el tráfico de linfocitos, conectando eventos proximales al receptor con respuestas transcripcionales posteriores. La desregulación de las vías asociadas a Hcls1 es relevante para estudios sobre señalización inflamatoria, activación aberrante de células inmunitarias y biología de células hematopoyéticas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Lck BP-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hcls1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hcls1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hcls1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Lck BP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hcls1 para la investigación de la señalización de Lck BP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hcls1 críticos para la función de Lck BP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hcls1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Lck BP-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hcls1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Lck BP-1 (m) y el plásmido HDR Lck BP-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hcls1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hcls1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.