Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plasmide Double Nickase (m) LC3B: sc-426563-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LC3B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LC3B Double Nickase (m) et le plasmide LC3B Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Map1lc3b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LC3B Antibody (G-9): sc-376404
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) LC3B | sc-426563-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) LC3B | sc-426563-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La souris Map1lc3b code la protéine associée aux microtubules 1, chaîne légère 3 bêta (LC3B), un composant central de la machinerie d’autophagie qui subit une lipidation pour former LC3-II et s’associer aux membranes des autophagosomes. LC3B soutient l’expansion du phagophore, la maturation des autophagosomes et le renouvellement sélectif des cargaisons grâce à des interactions avec des récepteurs contenant un motif LIR, tels que p62/SQSTM1, reliant des substrats ubiquitinylés à la séquestration autophagique. Marqueur largement utilisé du flux autophagique, LC3B est au cœur des voies de protéostasie dépendantes du lysosome, qui s’entrecroisent avec le contrôle qualité mitochondrial, la signalisation de l’immunité innée et les réponses au stress cellulaire. Une dérégulation de l’autophagie associée à LC3B a été impliquée dans des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, les états inflammatoires, la biologie des infections et l’adaptation des cellules cancéreuses, faisant de Map1lc3b une cible courante pour l’exploration des voies.
LC3B Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Map1lc3b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Map1lc3b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Map1lc3b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Map1lc3b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.