Plasmide CRISPR d'Activation (h) LBP-9: sc-404224-ACT

TFCP2L1 code le facteur de transcription LBP-9, une protéine de la famille CP2 se liant à l’ADN, qui régule des programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire, à la différenciation épithéliale et au contrôle transcriptionnel au cours du développement. LBP-9 a été impliqué dans le maintien d’états de type cellule souche et dans la coordination d’une transcription sensible aux signaux, en interaction avec des voies qui influencent la prolifération et l’engagement de lignée. Une activité dérégulée de TFCP2L1 et des réseaux transcriptionnels en aval altérés ont été associés à des phénotypes oncogéniques et à une différenciation aberrante dans de multiples contextes tissulaires. En tant que régulateur nucléaire, LBP-9 constitue un point d’entrée utile pour étudier le contrôle, dépendant de la chromatine, de réseaux de gènes pertinents pour la transformation et la plasticité cellulaire.

LBP-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TFCP2L1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LBP-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TFCP2L1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TFCP2L1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LBP-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TFCP2L1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LBP-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LBP-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de TFCP2L1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.