Plasmide CRISPR d'Activation (h) LATS1: sc-401312-ACT

LATS1 (large tumor suppressor kinase 1) est une sérine/thréonine kinase centrale de la voie de signalisation Hippo, qui freine la prolifération cellulaire et favorise l’apoptose en phosphorylant des effecteurs clés en aval tels que YAP/TAZ. En intégrant les signaux liés à la densité cellulaire, à la polarité, à la signalisation mécanique et aux entrées via les RCPG, LATS1 contribue au maintien de l’homéostasie tissulaire en limitant les programmes transcriptionnels qui stimulent la croissance et la transition épithélio-mésenchymateuse. Une activité dérégulée de LATS1 ou une altération de la voie Hippo est fréquemment associée à une inhibition de contact modifiée, à une instabilité génomique et à des états transcriptionnels oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux. Dans les cellules humaines, la fonction de LATS1 est également liée à l’organisation du cytosquelette et au contrôle du cycle cellulaire, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les interconnexions de signalisation qui façonnent la prolifération et la différenciation.

LATS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LATS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LATS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LATS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LATS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LATS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LATS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LATS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LATS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LATS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.