Plasmide CRISPR/Cas9 KO Latrophilin-3 (h): sc-411703

Présentation

ADGRL3 code la latrophiline-3, un récepteur d’adhérence couplé aux protéines G (GPCR) enrichi dans le système nerveux, qui agit aux contacts cellule–cellule pour réguler le développement des synapses, la croissance des neurites et l’assemblage des circuits. Grâce à ses domaines extracellulaires d’adhérence et à sa capacité de signalisation de type GPCR, la latrophiline-3 relie des ligands extracellulaires à des voies intracellulaires qui influencent le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et la connectivité neuronale. Des études génétiques et fonctionnelles impliquent ADGRL3 dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui étaye son intérêt comme point d’entrée moléculaire pour disséquer l’organisation synaptique et la signalisation à l’échelle des réseaux. L’étude expérimentale d’ADGRL3 est donc pertinente pour comprendre comment la signalisation des GPCR d’adhérence contribue à la différenciation neuronale, à l’excitabilité et au maintien synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Latrophilin-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADGRL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADGRL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADGRL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Latrophilin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADGRL3 pour l'étude de la signalisation de Latrophilin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADGRL3 essentiels à la fonction de Latrophilin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADGRL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Latrophilin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Latrophilin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADGRL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Latrophilin-3 plasmide HDR (h) et le Latrophilin-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADGRL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADGRL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.