Latrophilin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403945-ACT

ADGRL2 kodiert Latrophilin-2, einen Adhäsions-GPCR, der an der Zelloberfläche angereichert ist und dort die Zell-Zell-Kommunikation, synaptische Organisation sowie adhäsionsabhängige Signalübertragung vermittelt. Durch die Kopplung an heterotrimere G-Proteine und Interaktionen mit extrazellulären Liganden kann Latrophilin-2 Second-Messenger-Signalwege, Zytoskelett-Remodelling und die Ausbildung neuronaler Schaltkreise beeinflussen. Die Aktivität von ADGRL2 wurde mit Prozessen in Verbindung gebracht, die für Neuroentwicklung und Konnektivität relevant sind, was es nützlich macht, um Signalmechanismen zu untersuchen, die die Synapsenreifung und Netzwerkstabilität regulieren. Eine Fehlregulation der Adhäsions-GPCR-Signalgebung wird außerdem im Kontext veränderter Zelladhäsion und -migration untersucht und unterstützt damit breitere Analysen von Signalweg-Störungen in krankheitsrelevanten Modellen.

Latrophilin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADGRL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Latrophilin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADGRL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADGRL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Latrophilin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADGRL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Latrophilin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Latrophilin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADGRL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.