Plasmide CRISPR/Cas9 KO LAT (h): sc-401281

Présentation

Le « Linker for activation of T cells » (LAT) est une protéine adaptatrice transmembranaire qui est phosphorylée sur des résidus tyrosine en aval de l’engagement du récepteur des cellules T (TCR) et qui sert d’échafaudage pour l’assemblage de complexes de signalisation multiprotéiques. LAT coordonne le recrutement de GRB2, GADS, PLCγ1 et SOS afin de propager la signalisation via le flux calcique, les voies Ras–MAPK/ERK et NFAT/NF-κB, modulant ainsi l’activation des lymphocytes T, la production de cytokines et l’organisation de la synapse immunologique. Dans les cellules humaines, une intégration altérée des signaux dépendante de LAT est pertinente pour l’étude des dérégulations immunitaires, notamment les mécanismes contribuant à l’auto-immunité, à des phénotypes de type immunodéficience et à des programmes d’activation lymphocytaire aberrants. Comme LAT occupe un nœud critique de la signalisation proximale du TCR, il est largement utilisé comme point d’entrée pour disséquer l’architecture des voies, le contrôle par rétroaction et le codage amplitude–durée des signaux dans l’immunité adaptative.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LAT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LAT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LAT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LAT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LAT pour l'étude de la signalisation de LAT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LAT essentiels à la fonction de LAT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LAT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LAT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LAT plasmide HDR (h) et le LAT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LAT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LAT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.