Plasmide CRISPR d'Activation (h) LARP1: sc-404097-ACT

La LARP1 humaine (La ribonucléoprotéine 1) est une protéine liant l’ARN qui régule la stabilité des ARNm et leur traduction, avec des effets marqués sur les ARNm 5′TOP codant des protéines ribosomiques et des facteurs de traduction. Elle agit à l’interface du remodelage des mRNP et de la biogenèse des ribosomes, en intégrant des signaux nutritionnels et de croissance via une signalisation dépendante de mTORC1 afin de moduler la capacité de synthèse protéique. En façonnant la production traductionnelle et les programmes d’expression génique d’adaptation au stress, LARP1 contribue au contrôle de la croissance cellulaire, de la prolifération et de l’homéostasie métabolique. Une activité dérégulée de LARP1 et des altérations des réseaux mTOR–traduction ont été rapportées dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier le contrôle de la traduction et la régulation de la croissance cellulaire.

LARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LARP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LARP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LARP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LARP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LARP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LARP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LARP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LARP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.