Plasmide Double Nickase (h) LAMP1: sc-400120-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LAMP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAMP1 Double Nickase (h) et le plasmide LAMP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LAMP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LAMP1 Antibody (H4A3): sc-20011
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LAMP1 | sc-400120-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LAMP1 | sc-400120-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMP1 (lysosomal associated membrane protein 1) est une protéine membranaire de type I fortement glycosylée, enrichie sur les lysosomes et les endosomes tardifs, où elle soutient l’intégrité des organites et contribue au positionnement des lysosomes, à la dynamique de fusion et au renouvellement des cargaisons. Par ses rôles dans les voies autophagie–lysosome, le trafic endocytique et la stabilité de la membrane lysosomale, LAMP1 aide à coordonner la capacité de dégradation avec les réponses cellulaires au stress. LAMP1 participe également à la dégranulation des cellules immunitaires et au traitement des antigènes, reliant ainsi la fonction lysosomale à la signalisation inflammatoire. Une biologie lysosomale dérégulée impliquant LAMP1 a été associée à la neurodégénérescence, aux maladies de surcharge lysosomale, aux interactions hôte–pathogène liées aux infections, ainsi qu’aux phénotypes d’invasion et de métastase des cellules cancéreuses.
LAMP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.