Plasmide CRISPR/Cas9 KO LAMP1 (h): sc-400120

Présentation

LAMP1 (lysosomal associated membrane protein 1) est une glycoprotéine membranaire majeure de type I des endosomes tardifs et des lysosomes. Elle contribue au maintien de l’intégrité lysosomale et participe au trafic vésiculaire, à la fusion endosome–lysosome et au flux autophagie–lysosome. En contribuant au positionnement des lysosomes, à la protection de la membrane et à la capacité de dégradation, LAMP1 influence la présentation des antigènes, le renouvellement des protéines membranaires et les réponses cellulaires au stress nutritionnel. Des modifications de l’abondance ou de la localisation de LAMP1 sont fréquemment utilisées comme indicateur de la biogenèse lysosomale et des réponses au stress, et sont associées à des voies pertinentes pour la neurodégénérescence, l’infection et l’adaptation des cellules cancéreuses. LAMP1 est également couramment utilisée comme marqueur lysosomal dans les études de la dynamique des organites et des réseaux de signalisation liés aux lysosomes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LAMP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LAMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LAMP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LAMP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LAMP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LAMP1 pour l'étude de la signalisation de LAMP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LAMP1 essentiels à la fonction de LAMP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LAMP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LAMP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LAMP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LAMP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LAMP1 plasmide HDR (h) et le LAMP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LAMP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LAMP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.