LAMP-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421383-LAC

Lamp2 codifica a glicoproteína 2 associada à membrana lisossomal (LAMP-2), um componente importante da membrana limitante do lisossomo que sustenta a integridade do lisossomo e o tráfego de membranas. A LAMP-2 é central nas vias de autofagia–lisossomo, incluindo a autofagia mediada por chaperonas e a fusão entre autofagossomo e lisossomo, influenciando assim o controle de qualidade de proteínas, a renovação de organelas e as respostas celulares ao estresse. A alteração da atividade de LAMP-2 desregula a função lisossomal e o fluxo autofágico, processos implicados na homeostase de cardiomiócitos, na manutenção do músculo esquelético e em mecanismos neurodegenerativos. Em modelos murinos, Lamp2 é amplamente utilizada para investigar a biologia lisossomal, o imunometabolismo e as consequências celulares da depuração deficiente de macromoléculas.

As Partículas de Ativação Lentivirais LAMP-2 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Lamp2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais LAMP-2 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Lamp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de LAMP-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Lamp2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.