Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421376

Übersicht

Lama3 kodiert Laminin α-3, eine zentrale Untereinheit von Laminin-332, das in Basalmembranen eingebaut wird und die Adhäsion, Polarität und gerichtete Migration epithelialer Zellen unterstützt. Durch die Bindung an Integrine und die Zusammenarbeit mit Komponenten der Hemidesmosomen trägt Laminin α-3 dazu bei, die Dynamik fokaler Adhäsionen und die Organisation des Zytoskeletts über adhäsionsgekoppelte Signalwege wie FAK/SRC und PI3K–AKT zu koordinieren. In Mausgeweben trägt Lama3 zur Verankerung zwischen Epidermis und Dermis sowie zur Integrität der epithelialen Barriere bei; eine Dysregulation wird häufig im Zusammenhang mit gestörter Wundre-Epithelialisierung und veränderten epithelial-stromalen Interaktionen untersucht. Experimentelle Modelle, die auf Lama3 abzielen, werden eingesetzt, um die Assemblierung der extrazellulären Matrix, die Zell-Matrix-Mechanotransduktion und den Umbau der Basalmembran zu untersuchen, die für Gewebehomöostase und krankheitsassoziierte Mikroumgebungen relevant sind.

Das Laminin α-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lama3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lama3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lama3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Laminin α-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lama3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Laminin α-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lama3-Exone abzielen, die für die Laminin α-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lama3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Laminin α-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Laminin α-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lama3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Laminin α-3 HDR-Plasmid (m) und Laminin α-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lama3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lama3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.